NY_T 2313-2013 甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程

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ICS 65.020,B 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2313-2013,甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程,Rule for evaluation of cabbage resistance to fusarium wilt,2013-05-20 发布2013-08-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 2313-2013,刖 s,本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草,本标准由农业部种植业管理司提出,本标准由全国蔬菜标准化技术委员会(SAC/TC 467)归ロ,本标准起草单位:中国农业科学院蔬菜花卉研究所,本标准主要起草人:杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、龚慧芝、的振川、陈国华、凌键,I,NY/T 2313-2013,甘蓝抗枯萎病鉴定技术规程,1范围,本标准规定了甘蓝抗枯萎病鉴定方法和评价方法,本标准适用于甘蓝(Brassica o/eracea L.)抗枯萎病的室内鉴定及抗性评价,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,NY/T 1857.3黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程,3术语和定义,NY/T 1857. 3界定的以及下列术语和定义适用于本文件,3. 1,甘蓝枯萎病 cabbage fusarium wilt,由尖他镰刀菌黏团专化型orysヵ"〃中 Schl. f. sp. conglutinans (NfoWenw. ) Snyder &,Hansen1所引起的植株ー侧或整个下部叶片黄化,叶柄和茎部的维管组织变褐,植株小而萎農,病株逐,渐死亡等症状为主的甘蓝土传病害,4试剂与耗材,4. 1 PL培养液,马铃薯去皮切片,称取200 g,加1 000 mL蒸禰水,煮沸10 min.20 min,用纱布过滤,补加蒸禰水至,1 〇〇〇 mL,加入乳糖20 g,溶化后于121℃高压灭菌30 min,4. 2 PDA培养基,马铃薯去皮切片,称取200 g,加1 000 mL蒸储水,煮沸10 min.20 min,用纱布过滤,补加蒸储水至,1 000 m3加20 g琼脂粉,加热溶化后,再加入葡萄糖20 g,搅拌均匀并溶化后,于1211高压灭菌,30 min,4.3 1%的次氯酸钠(NaClO)溶液,取1 mし次氯酸钠于99 mし灭菌水中,摇匀,4.4 耗材,培养皿、锥形瓶、纱布、酒精灯、育苗钵、育苗盘等,5仪器设备,恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、灭菌锅、超净工作台、显微镜、移液器、血球计数板,6枯萎病菌接种体制备,6.1 病原物分离,从甘蓝枯萎病发病植株叶柄、茎基部用常规组织分离法分离枯萎病病原物。分离物鉴定参见附录,A。确认为尖抱镰刀菌黏团专化型oxysporum f. sp. 后,采用单抱分离法进行,1,NY/T 2313—2013,分离物纯化,经科赫(koch)法则验证后,保存备用,6.2 生理小种鉴定,对用于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种的鉴定,鉴定方法参见B. 2,6.3 接种体繁殖和保存,6.3. I接种体的繁殖,使用国内优势小种小种1作为接种病原物。繁殖方法为:将保存的甘蓝枯萎病菌置于25℃PDA平,板培养基上培养3 d活化后,接种于盛有PL培养液的锥形瓶中,置于25℃.28℃摇床上,以120 rpm振,荡培养3 d.4 d。培养液经两层医用纱布过滤即得以小型抱子为主的他子悬浮液,然后用蒸储水稀释,滤液至所需接种浓度,6.3.2病原物保存,常用保存方法为将甘蓝枯萎病菌接种于PDA斜面培养基上,在25℃的恒温箱中培养7 d,置4℃.,8℃冰箱内保存;或在斜面上加一层灭菌矿物油(超过斜面顶部1 cm)后置冰箱冷藏室或室温下保存,将甘蓝枯萎病菌接种于含20%丙三醇的液体中,置一80℃冰箱中冷冻保存,7室内抗性鉴定,7. 1鉴定室,人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件,使人工接种后具备良好的发病环境,7.2 鉴定设计,鉴定材料随机排列或顺序排列,每份鉴定材料重复3次,每一重复10株苗,7.3 鉴定对照材料,设甘蓝品种“珍奇”为抗病对照品种,“北农早生”为感病对照品种,7.4 鉴定材料育苗,鉴定种子在1%的次氯酸钠溶液中浸种5 mm.10 min,清水冲洗后置于25℃的恒温培养箱中催,芽,种子萌发后播种于育苗盘内。育苗基质为草炭、蛭石和菜田土(2 : 1 : D,经高温蒸汽灭菌(134℃,30 min)〇在日光温室里育苗,室内温度白天为20℃.25℃,夜晚为18℃.20℃。所有幼苗应生长健,壮、一致,7.5 接种,7. 5.1接种时期,甘蓝生育期2叶期.3叶期,7. 5.2接种浓度,接种体悬浮液的浓度为lx1。‘胞子/mL,7. 5.3接种方法,接种采用浸根接种法。将幼苗连根轻轻拔起后抖落干净根部泥土,然后将根全部浸于接种悬浮液,内!0 min.15 min,将接种后的甘蓝苗定植于装有育苗基质的育苗钵中,每钵1株,7.6 接种后管理,接种后将植株置于鉴定室内,每天光照!4 h,强度为70 f/Em-sT ,保持植株正常生长的土壤湿度,接种期间鉴定室温度控制在26て:.29℃范围内,8病情调查,8.1 调查时间,接种后10 d.15 d调查病情,根据此期间感病的对照品种病级扩展到感病病级的时间作适当调整,2,NY/T 2313-2013,8.2 病情级别划分,幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1、图院,表1甘蓝抗枯萎病室内鉴定病情级别的划分,病情级别症状描述,0 无症状,1 1片叶叶脉轻微变……

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